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利用种子蛋白SDS-PAGE电泳谱带鉴定菜豆品种真实性与纯度的研究_论文

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北方 园 艺 2 0 1 4 ( 0 7 ) : 9 1 ~ 9 5   ? 生物技术 ?   利用种子蛋 白 S D S _ P AGE 电泳 谱 带鉴 定 菜 豆 品种  真 实性 与 纯 度 的研 究  张  雪  ,李  爽  ,韩 玉 珠  ( 1 . 吉林 农业 大学 园 艺学 院 , 吉 林 长春 1 3 0 1 1 8 ; 2 . 吉林 省 农业 科 学 院 农村 能 源研 究所 , 吉林 长 春 1 3 0 0 3 3 )   摘 要: 以 不 同采 收 年 限 的 1 7个 菜 豆 品 种 的 种 子 为 试 材 , 采用 s D S — P A GE 电 泳 方 法 获 得 菜  豆种子贮藏蛋 白的 电泳图谱 , 比较分析其真 实性 ; 同时研 究种子蛋 白 S D S - P A G E技 术鉴定菜豆品  种真 实性和纯度的可行性 。结果表 明: 1 7个菜豆品种可 以通过 S D S - P AG E方法得到特征谱 带 A、   B 、 C、 D、 E 、 F 、 G、 H, 且各品种谱 带 差异明 显 ; S D S — P A G E蛋 白质 电泳方法 用 于鉴 定菜豆品 种真 实   性 和 种 子 纯 度 是 可行 的 。   关键词 : 菜豆 ; S D S - P A G E; 真实性 ; 纯度  中图分类号 : S   6 4 3 . 1   文献标识码 : A   文章编号 : 1 0 0 1 -0 0 0 9 ( 2 0 1 4 ) 0 7 -0 0 9 1 -0 5   我国是 重 要 的菜 豆主产 区, 品种资 源尤 为 丰富口 ] ,   但有些 品种 间从 种子 外形 上来 看极其 相似 。市场上 出   白进行 S D S - P A G E电泳 , 旨在 为找 到快速 、 准 确鉴 定菜  豆 品种真实性和种子纯度方法提 供参考 , 并为新 品种选  现的同名异 物和同物异名 的现象也屡 见不鲜 , 种 子真假  难辨 , 致使 种 子管 理单 位莫 衷一 是L 2 ] 。对 于 育种 工作 ,   品种 真实性 和种子纯度鉴定 是保证 良种遗传充 分发挥 ,   防止 良种混 杂退化 , 提高种子质 量和产 品品质 的必要手  段l _ 3 j 。 目前 , 我 国 主要 以 种 子 形 态 鉴 定 和 田间 小 区 种 植  育提供科学依据和技术支持 。   1 材 料与方 法  1 . 1 试验材料  供试 的 1 7 份菜豆材料 见表 1 , 均 由吉林农业大学园  艺学 院蔬菜教研室种子库提供 ; 1 7 个菜豆品种分为 2 0 1 1   年和 2 0 1 2 年采收 的菜豆种子 , 其来源为原种的获得 。   1 . 2 试 验 方 法  鉴 定为主 , 其缺点是 易受环境条件影 响 , 且 生产周期长 。   而电泳鉴定方 法和 分子标 记 鉴定方 法在 国内外 已开始  应用 。种子 中的蛋 白质组分是 基 因表 达的产物 , 记录了   物种 在发育过程 中的亲缘关 系 , 以及种 间与品种 间的遗  传差异[ 4 ] 。目前 , S 【  P A G E技 术在亚 基水* 上对 特定  蛋 白质 的分析 已取得 了显著 的进 展  ] , 电场 的 电荷 效  应 和凝胶 的分 子筛选 效应 使 多肽 的蛋 白质在支 持 物上  产生不 同的迁移 速度 而位 于不 同 的位 置通 过染 色形 成  试验于 2 0 1 2 年 1 O月 于吉林 农业 大学 园 艺学 院生  化实验室进行 。重复试验 2 0 次。   1 . 2 . 1   不 同品种 间的 S I )  P A G E电泳方 法  样 品的制  备: 试验试 剂按照常 规方法 配置 , Ma r k e r 为北京 鼎 国盛  生物技术有 限责任公司 P M0 0 3 3 ( 2 2 0 - -  ̄ 1 6   k D a ) 。试验分  别取在 4 2 ℃下烘干 3 6   h的干种子 1 粒, 去种皮 , 将去种  不 同的谱带口  , 其谱 带较稳定 , 且 均匀性 较好 , 多态性较  高 。利用 S D S - P A G E蛋 白质 电泳方 法鉴定 作物 真 实性  和纯度 , 已在辣椒 L 】  、 水 稻l _ 1 引、 啤酒大 麦口  中获得 成功 ,   但在菜豆 中的应 用研 究 尚鲜 见报 道 。该研 究通 过对 不  同采收年限且种子形态相似 的 1 7个菜豆 品种 的贮藏 蛋  皮后 的种子研磨成 粉末 状 , 每粒种子 称取 0 . 0 5 2   g子 叶  粉末装入 2   m L离心管 中, 加人 1   m L   S D S样 品处 理液 ,   重蒸馏水定 容 至 2   mI   , 摇 匀后 在 1 1   0 0 0   r / mi n下离 心  2 0   mi n , 取0 . 2   m I   上 清液 和 0 . 3   mL样 品缓 冲液 加 入  1 . 5   mI   离心管中 , 沸水浴 3   m i n , 放于 -2 0 ℃冰箱中冷冻  保存 , 作电泳样 品。S D S — P AG E电泳 : 每 次点样前 , 样 品  第一作 者 简介 : 张 雪( 1 9 8 7 一 ) , 女, 吉林 省 吉林 市 人 , 硕士研究生, 研  究方 向 为 蔬 菜 遗 传 育 种 与 生 物 技 术 。 E — m a i l : 4 9 4 5 3 9 4 4 7 @  q q . c or n .   需要先沸水 浴 3   mi n 。电泳采用 垂直 电泳方 法 , 参照生  物化学方法[ 1   ¨   进行 分离 胶和浓 缩胶 浓度分 别 1 5   和  5   9 , 6 。照相 : 电泳完成后 , 取出胶片 , 放人 0 . 1   9


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